一、從培養(yǎng)液中分離雜種細(xì)胞的方法和原理｛僅限高中知識｝

方法：根據(jù)雜種細(xì)胞由什么細(xì)胞雜交的，根據(jù)雜種細(xì)胞擁有的特性配制特定的培養(yǎng)基來提取。

2原理：雜交細(xì)胞具有參與雜交的細(xì)胞的特性。

二、太陽能電池片加工中的摻雜與擴(kuò)散原理？

我明白你的意思了?，F(xiàn)在工業(yè)生產(chǎn)太陽能電池片的硅片，都是P型襯底，意思是之前已經(jīng)摻雜三族元素了，我們只需要進(jìn)行磷擴(kuò)散，就可以形成P-N結(jié)。

以n型半導(dǎo)體為底板結(jié)構(gòu)的結(jié)晶硅類太陽能電池與以p型半導(dǎo)體為底板的結(jié)構(gòu)相比，前者對雜質(zhì)的抵抗性更大，在理論上更易提高能量轉(zhuǎn)換效率。不過，此前許多結(jié)晶硅類太陽能電池幾乎都采用以p型半導(dǎo)體為底板的結(jié)構(gòu)。原因是在較厚的p型半導(dǎo)體上能夠形成非常薄的n型半導(dǎo)體層。

德國弗勞恩霍夫太陽能系統(tǒng)研究所（Fraunhofer ISE）宣布，該機(jī)構(gòu)研制的以n型半導(dǎo)體為底板，然后在其上面形成較薄的p型半導(dǎo)體層的單晶硅太陽能電池，其能量轉(zhuǎn)換效率達(dá)到了23.4％。太陽能電池單元面積為2cm見方。

三、酵母雙雜交的原理？

酵母雙雜交系統(tǒng)由 Fields和Song等首先在研究真核基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中建立 i 。典型的真核生長轉(zhuǎn)錄因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二個不同的結(jié)構(gòu)域: DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(DNA-binding domain)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(transcription-activating domain)。前者可識別DNA上的特異序列， 并使轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域定位于所調(diào)節(jié)的基因的上游， 轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域可同轉(zhuǎn)錄復(fù)合體的其他成分作用， 啟動它所調(diào)節(jié)的基因的轉(zhuǎn)錄。

二個結(jié)構(gòu)域不但可在其連接區(qū)適當(dāng)部位打開， 仍具有各自的功能。而且不同兩結(jié)構(gòu)域可重建發(fā)揮轉(zhuǎn)錄激活作用。酵母雙雜交系統(tǒng)利用雜交基因通過激活報道基因的表達(dá)探測蛋白－蛋白的相互作用。主要有二類載體: a 含DNA -binding domain的載體; b 含DNA-activating domain的載體。上述二類載體在構(gòu)建融合基因時， 測試蛋白基因與結(jié)構(gòu)域基因必須在閱讀框內(nèi)融合。融合基因在報告株中表達(dá)， 其表達(dá)產(chǎn)物只有定位于核內(nèi)才能驅(qū)動報告基因的轉(zhuǎn)錄。例如GAL4-bd具有核定位序列(nuclear-localization sequenc

[利用酵母雙雜交篩選基因]

利用酵母雙雜交篩選基因

e)， 而GAL4-ad沒有。因此， 在GAL4-ad氨基端或羧基端應(yīng)克隆來自SV40的T-抗原的一段序列作為核定位的序列。目前研究中常用binding-domain基因有： GAL4(1-147); LexA (E coli轉(zhuǎn)錄抑制因子)的DNA-bd編碼序列。常用的activating-domain基因有： GAL4(768-881)和皰疹病毒VP16的編碼序列等。

雙雜交系統(tǒng)的另一個重要的元件是報道株。報道株指經(jīng)改造的、含報道基因(reporter gene)的重組質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。最常用的是酵母細(xì)胞， 酵母細(xì)胞作為報道株的酵母雙雜交系統(tǒng)具有許多優(yōu)點(diǎn): 〈1〉 易于轉(zhuǎn)化、便于回收擴(kuò)增質(zhì)粒。〈2〉具有可直接進(jìn)行選擇的標(biāo)記基因和特征性報道基因?！?〉酵母的內(nèi)源性蛋白不易同來源于哺乳動物的蛋白結(jié)合。一般編碼一個蛋白的基因融合到明確的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的DNA－結(jié)合結(jié)構(gòu)域(如GAL4-bd， LexA-bd)； 另一個基因融合到轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(如GAL4-ad， VP16)。激活結(jié)構(gòu)域融合基因轉(zhuǎn)入表達(dá)結(jié)合結(jié)構(gòu)域融合基因的酵母細(xì)胞系中， 蛋白間的作用使得轉(zhuǎn)錄因子重建導(dǎo)致相鄰的報道基因表達(dá)(如lacZ)， 從而可分析蛋白間的結(jié)合作用。

酵母雙雜交系統(tǒng)能在體內(nèi)測定蛋白質(zhì)的結(jié)合作用， 具有高度敏感性。主要是由于：①采用高拷貝和強(qiáng)啟動子的表達(dá)載體使雜合蛋白過量表達(dá)。②信號測定是在自然平衡濃度條件下進(jìn)行， 而如免疫共沉淀等物理方法為達(dá)到此條件需進(jìn)行多次洗滌，降低了信號強(qiáng)度。③雜交蛋白間穩(wěn)定度可被激活結(jié)構(gòu)域和結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物而增強(qiáng)， 后者又與啟動子DNA結(jié)合， 此三元復(fù)合體使其中各組分的結(jié)合趨于穩(wěn)定。④通過mRNA產(chǎn)生多種穩(wěn)定的酶使信號放大。 同時， 酵母表型， X-Gal及HIS3蛋白表達(dá)等檢測方法均很敏感。

四、超聲波能夠檢測混凝土哪些缺陷？檢測的基本原理是什么？

可以檢測混凝土密實(shí)度、內(nèi)部空洞、裂縫深度、結(jié)合面質(zhì)量、完整性（特別是樁基）等缺陷。

基本原理是：采用超聲波檢測儀，測量超聲脈沖波在混凝土中的傳播速度(簡稱聲速)、首波幅度(簡稱波幅)和接收信號主頻率(簡稱主頻)等聲學(xué)參數(shù)，并根據(jù)這些參數(shù)及其相對變化，判定混凝土中的缺陷情況。

詳見《超聲法檢測混凝土缺陷技術(shù)規(guī)程》CECS21-2000

五、洗滌劑是如何瓦解細(xì)胞膜的 說原理

洗滌劑一般分子一般有兩個功能結(jié)構(gòu)。一個親水結(jié)構(gòu)，和水相溶，一個疏水結(jié)構(gòu)，能與細(xì)胞膜的脂類相溶，與脂類相溶的結(jié)構(gòu)可以破壞細(xì)胞膜。

六、α互補(bǔ)篩選的原理是什么？

載體帶有一個大腸桿菌的DNA的短區(qū)段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的調(diào)控序列和前146個氨基酸的編碼信息。在這個編碼區(qū)中插入了一個多克隆位點(diǎn)（MCS），它并不破壞讀框，但可使少數(shù)幾個氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影響功能，這種載體適用于可編碼β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主細(xì)胞。因此，宿主和質(zhì)粒編碼的片段雖都沒有酶活性，但它們同時存在時，可形成具有酶學(xué)活性的蛋白質(zhì)。這樣，lacZ基因在缺少近操縱基因區(qū)段的宿主細(xì)胞與帶有完整近操縱基因區(qū)段的質(zhì)粒之間實(shí)現(xiàn)了互補(bǔ)，稱為α-互補(bǔ)。由α-互補(bǔ)而產(chǎn)生的LacZ+細(xì)菌在誘導(dǎo)劑IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在時產(chǎn)生藍(lán)色菌落，因而易于識別。然而，當(dāng)外源DNA插入到質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)后，幾乎不可避免地導(dǎo)致無α-互補(bǔ)能力的氨基端片段，使得帶有重組質(zhì)粒的細(xì)菌形成白色菌落。這種重組子的篩選，又稱為藍(lán)白斑篩選。如用藍(lán)白斑篩選則經(jīng)連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化的鈣化菌平板37℃溫箱倒置培養(yǎng)12-16hr后，有重組質(zhì)粒的細(xì)菌形成白色菌落。